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酶的提取与制备            【字体:
酶的提取与制备
作者:佚名    文章来源:21世纪精细化工    点击数:    更新时间:2007-9-21



文章摘要酶是一类由生物细胞合成的具有催化活性和高度专一性的特殊蛋白质。生物细胞均产生自己所需要的酶。生物体内的各种代谢反应,均需特殊的酶参加催化。存在于细胞内的酶称胞内酶。由细胞内合成而分泌到细胞外起作用的酶称胞外酶,如消化液及其它体液中的酶类。在酶作用下进行化学变化的物质称底物。酶催化的化学反应称酶促反应。各种动物器官和体液含有酶的种类和数量差别甚大。一般所含酶的总量并不很少,但每一种酶的含量却很少,常......


bsp;   1963年Reid首次发表了马来亚红口蝮蛇(Agkistrodom rhodostoma)咬伤研究的报告,数十例病人共同的特点凝血失调,丧失了凝结能力,原因是蛇毒里含有一种与人凝血酶(Thrombin)相似的酶,称类凝血酶(Thrombin-like,又译作凝血酶样),在人体内引起消耗性脱血纤蛋白降解形成松散的凝块,在体内这种凝块很易被纤溶酶(Plasmin)溶解,在酶的不断作用下消耗了血纤蛋白原,使血液呈低凝状态。由于对血液中凝血因子V.X.XII均无作用,不能像人凝血酶激活XII因子,使血纤蛋白形成交联的凝块,不易清除。因它不凝集血小板,故仍能维持正常止血功能,因而在临床上被用做防治血栓性疾病的有效抗凝药(商品名为抗栓酶、清栓酶、去纤酶等)。

    与α-凝血酶不同,形成纤维蛋白凝血块时,仅释放纤维蛋白肽A。因此所生成的凝血块较α-凝血酶所产生的弱。一般认为是内部和内部所形成的纤维蛋白聚合物。不被除肝素外血中蛋白酶抑制剂的抗凝血酶Ⅲ所抑制,与α-凝血酶不同。

    由于蛇毒类凝血酶对纤维蛋白原的作用方式不同于血浆凝血酶,它也被用作研究纤维蛋白凝聚机制的重要工具。

    自Esnouf等人首先由红口蝮(Agkistrodom rhodostoma)毒液分离纯化得到具有凝血酶样活性组分以后,陆续从蝮蛇属(Agkistrodon)、响尾蛇属(Crotalus)、矛头蝮蛇属(Bothrops)蝰属、竹叶青属(Trimeresurus)中均分离得到凝血酶样活性组分。我国已从东北产蝮蛇、浙江产蝮蛇、尖吻蝮蛇及竹叶青等蛇毒中分出类凝血酶,并用于临床。最近几年里用于治疗静脉血栓、脑血栓等血管栓塞性疾病已有上万病例,疗效较好。

红口蝮蛇毒类凝血酶

    Ancord(Arvin,EC3.4.21.28)是从红口蝮蛇毒中提出的类凝血酶,属于一种糖蛋白。有单体和二聚体。分子量35400。等电点pH4.2-6.2E1%280nm9.85.糖含量36.03%。最适pH8.5。合成抑制剂有DFP PMSF TLCK等。有显著的精氨酸酯酶活性,对纤维蛋白原的凝固作用不被肝素、水蛭素和大豆胰蛋白酶抑制剂所抑制。Acord作用于纤维蛋白原后,从中释放出3个纤维蛋白肽,即A、AP和AY,这与凝血酶的作用很相似,但不同的是Ancord不能释放B肽,即不能作用于纤维蛋白原的B链。

    因Ancord是有限的切割纤维蛋白原,且不能活化因子XII,故作用于纤维蛋白原后所产生的是不能交联的,易于溶解的纤维蛋白块,这种纤维蛋白块能很快从循环中消失,从而引起血浆中的去纤作用。加之Ancord对其他凝血因子无影响,因此已作为一种抗凝血药物用于临床。

蝮蛇蛇毒类凝血酶

    浙江产蝮蛇蛇毒含3种具有精氨酸酯酶活性的组分。它们是激肽释放酶、类凝血酶、类溶血纤溶酶。其中类凝血酶的精氨酸酯酶活力最高,约占总酯酶活力的60%。

    该类凝血酶在聚丙烯酰胺凝胶电泳呈一条区带。经凝胶过滤及SDS聚丙稀酰胺凝胶电泳测定,分子量为43000,氨基酸组成分析表明,有较多酸性氨基酸及脯氨酸,含6%中性糖,9%已糖及3.3%唾液酸。

    它可直接使血纤维蛋白原凝集,水解BAEE的活力约是胰蛋白酶的2.7倍,Km为3.4×10-4mol/L,高于其它已知蝮亚科蛇毒类类凝血酶活力。它不作用于BANA BAPA及其他蛋白底物。蛇毒类凝血酶与人凝血酶一样,对专一荧光底物Boc-Val-Arg-MCA有明显活性,但其凝结血纤维蛋白原的活性远低于人凝血酶。

    此类凝血酶被DFP及MP所制,但抑制速度较慢,不被胰蛋白酶的专一抑制剂TLCK所抑制,因而也是专一性较强的丝氨酸蛋白酶。

尖吻蝮蛇毒类凝血酶

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